【技術視頻】細胞轉染

細胞轉染實驗步驟 ：

1 、轉染實驗試劑展示 ：Opti-MEM培養基 ，miRNA ，Lipofectamine™ 2000 Transfection Reagent ；

2 、取出6孔培養板 ；

3 、提前做好標記 ；

4 、每孔加入2mL培養基 ；

5 、調整細胞濃度 ，每孔加入5×10^5 個細胞 ；

6 、混勻細胞 ；

7 、將6孔板放入培養箱 ，過夜培養 ，使細胞貼壁 ；

8 、取出3個1.5mL EP管 ，做好標記 ，2個miRNA管 ，1個Lip2000管 ；

9 、其中2個miRNA管每管加入250μL Opti-MEM培養基 ；

10 、Lip2000管加入500μL Opti-MEM培養基 ；

11 、Lip2000管加入10μL Lipofectamine™ 2000 Transfection Reagent ，輕輕吹吸混勻 ；

12 、miRNA管每管加入5μL（100pmol）miRNA ，輕輕吹吸混勻 ；

13 、室溫下靜置 5 min ；

14 、將Lip2000管液體按照每管255μL緩緩加入miRNA管 ，輕輕吹吸混勻 ；

15 、室溫靜置20min ；

16 、取出培養板 ，吸除培養基 ；

17 、每孔加入1.5mL新鮮培養基 ；

18 、將510µL複合物加入對應孔中 ；

19 、輕輕晃動6孔板 ；

20 、將6孔板放入培養箱 ；

21 、培養4h後取出培養板 ；

22 、吸除培養基 ；

23 、每孔加入2mL新鮮培養基 ；

24 、將6孔板放入培養箱 ，培養24h-72h後進行後續檢測 。

細胞轉染（1）

細胞轉染（2）

細胞轉染（3）