如何鑒定收到的新細胞是否有汙染
:
一
、肉眼觀察以下幾項
:
1. 細胞瓶身
:
如果瓶身上沒有裂縫
,正常
;如果瓶身上有裂縫
,則汙染幾率非常大
。
2. 培養基顏色
:
如果培養基顏色是紅色或者粉色
,正常
;如果是橙色
,則可能是汙染或者細胞過密
;如果是黃色
,則汙染幾率非常大
。
3. 培養基澄清度
:
如果培養基澄清
,正常;如果有少許漂浮物
,則可能是汙染或者有細胞凋亡
;如果培養基很渾濁
,甚至出現絮狀物
,則汙染幾率非常大
。
二
、進行顯微鏡下觀察(通常觀察前需先靜置細胞1-2h)
顯微鏡下可以清晰觀察到細胞是否有菌類汙染
,菌類汙染通常分為杆菌
、球菌和黴菌
,為了方便大家分辨,我特地找了之前收到有典型汙染的細胞照片
,希望能幫助大家判斷
。
1. 杆菌
常見的有大腸杆菌
,長度通常在2-5um左右
。
2. 球菌
常見的有葡萄球菌
,直徑通常在1-2um左右
。
3. 黴菌
常見的有毛黴
,菌絲寬2-10um左右
,長度短則幾十um
,長則可達幾mm
。
需要提醒的是
,因為運輸過程中細胞離開了其正常生長所需要的環境
,部分細胞會出現凋亡或產生細胞碎片
,容易誤認為是細菌汙染
;另外培養基中的雜質纖維也容易誤認為是黴菌汙染
,具體區分方法如下
:
1.細胞碎片和杆菌
細胞碎片隻會隨著細胞狀態的變差而變多
,通常增長不快
;杆菌則增殖非常快
,以常見的大腸杆菌為例
,常溫25℃增殖1倍需要40min左右(此數據可查閱相關文獻驗證)
,培養基很快變黃且渾濁
。
2.凋亡細胞和球菌
凋亡細胞通常隻比正常細胞小一點
,隻會隨著細胞狀態的變差而變多
,通常增長不快
;球菌則要小很多
,且成串或成團
,培養基很快變黃且渾濁
。
3.雜質纖維和黴菌
雜質纖維通常是過濾時殘留的濾紙纖維
,或者是酒精棉球上的棉纖維
,在不開瓶處理的情況下其數量不會增長
;黴菌的話雖然增殖速度沒有杆菌和球菌快
,但還是會有明顯增殖
。