細胞培養基礎篇-傳代

傳代是貼壁細胞培養過程中不可或缺的一步 ，也是最容易出問題的一步 ，今天就來說下細胞傳代的操作步驟和注意細節 。

操作步驟 ：

1.用移液器吸走原培養基 ，加入適量PBS洗1-2遍 ；

2.加入適量胰酶 ，置於培養箱中消化 ；

3.待消化到位後加入適量血清或完全培養基終止消化 ，800-1000rpm離心3-5min ；

4.去上清 ，加入適量完全培養基重懸後轉移到培養皿 ，放37度培養箱 。

注意細節 ：

1.吸走原培養基時盡量吸盡 ，用PBS漂洗時也是 ，此步驟的目的是盡量減少培養基中血清對胰酶消化時的影響 ；

2.加入胰酶量要根據培養皿規格和細胞量決定 ，通常以剛沒過細胞為宜 ；

3.消化時間需要同時考慮到細胞本身特性 ，細胞密度 ，胰酶濃度等多方麵因素 ，靈活調整 ，切忌生搬硬套 ；

4.通常細胞消化到其剛好不貼壁時終止最好 ，如果消化不到位 ，靠外力強行吹下來 ，則細胞膜很容易被撕裂 ，導致傳代後出現細胞碎片和死細胞 ；如果消化過度 ，則細胞膜通透性會發生改變 ，導致傳代後出現凋亡細胞 。

5.部分對離心敏感的細胞（主要是原代細胞） ，可以加入胰酶後室溫放置30s左右，然後吸去大部分胰酶 ，再放培養箱消化 ，消化到位後直接加入足量完全培養基終止消化 ，待其貼壁後再換液去掉殘餘胰酶 。

6.傳代過程中加入任何試劑都應該輕柔緩慢的加到皿壁 ，切忌直接加到細胞麵上，如果細胞本身貼壁能力較差 ，可能導致細胞凋亡 。